法國梅里埃公司 API20E 腸道菌試劑鑒定條

上面就是API20E的鑒定試劑條，也就是用來鑒定腸道細菌之用途的。一共是20種生化反應(yīng)再加手工操作的氧化酶試驗（ARA后面的OX）。非常贊嘆梅里埃公司的厲害，能把非常復(fù)雜的生化反應(yīng)做成那么小的試劑條，而且還做了細菌生化反應(yīng)數(shù)據(jù)庫，好龐大的工作量和好精細的工作…………下面我來分別介紹一下這20種生化反應(yīng)原理以及用途：復(fù)雜但是很有趣味……

1）ONPG試驗 翻譯成中文是：鄰硝基苯-半乳糖苷酶試驗。用來檢測細菌是否發(fā)酵乳糖。原理是因為乳糖發(fā)酵過程中需要乳糖通透酶和β－半乳糖苷酶才能快速分解，但是有些細菌沒有乳糖通透酶，只有半乳糖苷酶，所以會導(dǎo)致遲緩發(fā)酵。由此可得，如果某種細菌能夠發(fā)酵乳糖，那么一定會產(chǎn)生β－半乳糖苷酶。ONPG試驗是將ONPG作為底物，如果細菌產(chǎn)生β－半乳糖苷酶，那么會水解ONPG為半乳糖和黃色的鄰-硝基苯酚（ONP），培養(yǎng)液會變成黃色。因此試驗結(jié)果為陽性。

2）ADH 精氨酸雙水解酶試驗:某些細菌能產(chǎn)生精氨酸水解酶，先水解精氨酸生成瓜氨酸和氨，再水解瓜氨酸生成鳥氨酸、氨和二氧化碳。因此使培養(yǎng)基呈堿性。用于陰溝腸桿菌（陽性）和產(chǎn)氣腸桿菌（陰性）的鑒別。（氨基酸分解過程是在厭氧環(huán)境中進行的，所以要加蓋石蠟油造成厭氧環(huán)境）。

3）LDC 賴氨酸脫羧酶試驗：某些細菌能產(chǎn)生賴氨酸脫羧酶，可以將賴氨酸脫羧生成胺和二氧化碳，但是堿性更強，使培養(yǎng)基呈紫色（溴甲酚紫指示劑）。用來鑒別用于產(chǎn)氣腸桿菌（陽性）與陰溝腸桿菌（陰性）。

4）ODC 鳥氨酸脫羧酶試驗：某些細菌產(chǎn)生鳥氨酸脫羧酶，將鳥氨酸脫羧生成胺和二氧化碳，是培養(yǎng)基呈堿性。用來鑒別鳥氨酸用于陰溝腸桿菌（陽性）和克雷伯菌（陰性）。

5）CIT 檸檬酸鹽（又稱枸櫞酸鹽）利用實驗：當檸檬酸鹽作為的碳源，某些細菌能利用此碳源而分解檸檬酸鹽產(chǎn)生碳酸鹽，而使培養(yǎng)基呈堿性由淺綠色變成深藍色。腸桿菌科中：沙門菌屬、克雷伯菌屬、粘質(zhì)和液化沙雷菌及某些變形桿菌以及枸櫞酸桿菌陽性；而埃希菌屬、志賀菌屬、愛德華菌屬和耶爾森菌屬均為陰性。

6）H2S 硫化氫實驗：某些細菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸）生成硫化氫，遇鉛或亞鐵離子生成黑色硫化物；或者還原培養(yǎng)基中含硫化合物而產(chǎn)生硫化氫，與二價鐵生成黑色的硫化亞鐵，陰性不產(chǎn)生黑色沉淀。腸桿菌科中沙門菌屬、愛德華菌屬、枸櫞酸桿菌屬和變形桿菌屬細菌，絕大多數(shù)硫化氫陽性，其它菌屬陰性。

7）URE 尿素酶實驗：某些細菌能產(chǎn)生尿素酶分解尿素，產(chǎn)生大量的氨使培養(yǎng)基變堿。使酚紅指示劑變紅為陽性，不變?yōu)殛幮浴Ｆ娈愖冃螚U菌和普通變形桿菌、雷極普羅威登菌和摩根摩根菌陽性，沙門菌、斯氏和產(chǎn)堿普羅威登菌陰性。

8）TDA 苯丙氨酸脫氨酶實驗：某些細菌可產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶，使苯丙氨酸脫去氨基，形成苯丙酮酸和游離的氨，加入三氯化鐵試劑與苯丙酮酸螯合后產(chǎn)生綠色反應(yīng)。大量接種被檢菌于苯丙氨酸瓊脂斜面上，35℃培養(yǎng)18~24h，加入10%三氯化鐵試劑出現(xiàn)綠色為陽性。主要用于鑒定變形桿菌屬、摩根菌屬和普羅威登菌屬細菌，均為強陽性，腸桿菌科中其它細菌均為陰性。

9）VP 實驗：測定細菌產(chǎn)生乙酰甲基甲醇的能力。某些細菌如產(chǎn)氣腸桿菌，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進一步脫羧形成乙酰甲基甲醇。在堿性條件下，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰，進而與培養(yǎng)基中的精氨酸等含胍基的物質(zhì)結(jié)合形成紅色化合物。即V-P試驗陽性。所以附加試劑中VP1是強堿性物質(zhì)（KOH溶液）。

10）GEL 明膠液化實驗：某些具有明教酶（亦稱類蛋白水解酶），蛋白酶的功用在使不能吸收的蛋白質(zhì)變?yōu)榭梢酝溉刖w的多肽或氨基酸，這種酶主要為胞外酶，能將明膠先水解為多肽，又進一步水解為氨基酸，失去凝膠性質(zhì)而液化，讓反應(yīng)孔內(nèi)的黑色物質(zhì)擴散，而呈陽性反應(yīng)。變形桿菌、芽胞桿菌、梭菌等具有很強的胞外酶的活性。

11）IND 吲哚試驗：某些細菌能夠分解色氨酸生成吲哚，吲哚與試劑中的對二甲氨基苯甲醛生成玫瑰吲哚，變成紅色，為陽性反應(yīng)。用來檢測細菌分解色氨酸的能力。

12）GLU 葡萄糖發(fā)酵試驗：某些細菌發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸，變黃。

13）MAN 甘露醇發(fā)酵試驗：某些細菌發(fā)酵甘露醇，產(chǎn)酸，變黃。

14）IND  肌醇發(fā)酵試驗：某些細菌發(fā)酵肌醇，產(chǎn)酸，變黃。

15）SOR 山梨醇發(fā)酵試驗：某些細菌發(fā)酵山梨醇，產(chǎn)酸，變黃。

16）RHA 鼠李糖試驗：某些細菌發(fā)酵鼠李糖，產(chǎn)酸，變黃。

17）SAC 蔗糖發(fā)酵試驗，某些細菌發(fā)酵蔗糖，產(chǎn)酸，變黃。

18）MEL 密二糖發(fā)酵試驗：某些細菌發(fā)酵密二糖，產(chǎn)酸，變黃。

19）AMY 苦杏仁苷發(fā)酵試驗：某些細菌發(fā)酵苦杏仁苷，產(chǎn)酸，變黃。

20）ARA 阿拉伯糖試驗： 某些細菌發(fā)酵阿拉伯糖，產(chǎn)酸，變黃。